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专业知识科普--10%福尔马林中性固定液pH的控制
2023-12-04 15:04
10%福尔马林中性固定液,其pH值的控制主要是用磷酸盐。磷酸氢二钠是偏碱性的,磷酸二氢钠是偏酸性的,两者主要以结晶水形式存在,前者常带12个结晶(称十二水磷酸氢二钠Na2HPO4·12H2O,分子量358.142),后者常带2各结晶水(称二水磷酸二氢钠NaH2PO4·2H2O,分子量156.01),也有无水磷酸氢二钠(Na2HPO₄分子量142.142)和无水磷酸二氢钠(NaH2PO4分子量)120.01)。两者不同组成比例其水溶液可得到不同pH值(其水溶液称为磷酸盐缓冲液)。为了控制pH值7.2,不同单位、不同专家都有自己的比例
举例如下:
备注:
1):从磷酸氢二钠/磷酸二氢钠的摩尔数比可以推测上海的pH值为最高,同济的第二高,福建的为最低
2):从磷酸氢二钠/磷酸二氢钠的摩尔数之和可推测上海的缓冲力最强,福建的第二,同济的最低
3):从磷酸氢二钠/磷酸二氢钠的摩尔数之和可看出上海的磷酸盐用量最大,福建的第二,同济的最低。
测量固定液的pH值最正确的方式是:选用能三点式校正的并具有温度补偿的pH计,测量前必须对pH计进行校正,校正完毕后验证是否校正到位,到位后方可进行固定液的p H值测量,此时pH计显示的值才是正确的值。
校正要用三种标准缓冲液按pH计的说明书来进行校正。测定固定液的pH计一般选用pH4.0(邻苯二甲酸氢钾)、pH6.86(混合磷酸盐)、pH9.18(四硼酸钠),三用标准缓冲液(市面上用成品卖)来校正即可。校正过程必须按pH计的说明书规定进行。校正完毕后要验证校正是否到位。
pH计的校正后的验证:pH计的校正后,用蒸馏水冲洗,然后随意放入校正用的标准缓冲液中,比如放入pH6.86(混合磷酸盐)标准缓冲液中,此时pH计显示的值应在6.84~6.88之间,如放入pH4.0(邻苯二甲酸氢钾)标准缓冲液中,此时pH计显示的值应在3.98~4.02之间,如放入pH9.18(四硼酸钠)标准缓冲液中,此时pH计显示的值应在9.16~9.20之间,否则需重新校正pH计。
固定液的测量时正确操作:用蒸馏水冲洗pH计(玻璃球部位)并用吸水纸吸尽水分,将pH计插入待测固定液中,轻轻振动pH计(约10秒钟),静置pH计,待pH计上的数值稳定(不跳动)后便读取其数字,此数字则是固定液的pH值。
本公司10%福尔马林中性固定液pH值控制方式也是采用磷酸盐缓冲液来控制,磷酸盐的用量是在充分考虑细胞液和组织间液的pH值和其渗透压的基础上拟定。不同于上述三家的用量。公司产品质量标准中规定的范围(6.90~7.50)是经过稳定性实验而拟定。在有效期内,临近效期时最低pH值不会低于6.9,刚出厂时最高pH值不会高于7.5。公司产品出厂时一般控制在7.10~7.30之间。
本公司技术人员注意到“福尔马林与磷酸盐缓冲液混匀在一起时,立即测pH值与放置12小时后测其pH值两者相差较大;立即测得的pH值往往高于放置12小时后测得的pH值0.3左右;放置12小时后,其pH值下降幅度就很小”。本公司10%福尔马林中性固定液pH值是配制完毕并放置12小时后测得的值。
10%福尔马林中性固定液pH值的控制的要点:
1、磷酸盐缓冲液的磷酸盐的浓度不能太高,也不能太低,建议用0.02mol的浓度为宜,此浓度的渗透压与细胞液和组织液的渗透压相近。
2、pH7.2~7.4磷酸盐缓冲液加福尔马林混匀放置12小时后,其pH值会下降0.3左右,有的会下降更多,与所用原料(福尔马林溶液)中的甲酸含量多少有关。
3、pH计建议选用三点式校正的并具有温度补偿的pH计,测量前必须对p H计进行校正,校正完毕后要验证校正是否到位。
4、pH计校正:一般选用pH4.0(邻苯二甲酸氢钾)、pH6.86(混合磷酸盐)、pH9.18(四硼酸钠)三用标准缓冲液(市面上用成品卖)来校正,校正过程必须按pH计的说明书规定进行,校正完毕后要验证校正是否到位。
5、验证校正是否到位:pH计的校正后,用蒸馏水冲洗,然后随意放入校正用的标准缓冲液中,比如放入pH6.86(混合磷酸盐)标准缓冲液中,此时pH计显示的值应在6.84~6.88之间,如放入pH4.0(邻苯二甲酸氢钾)标准缓冲液中,此时pH计显示的值应在3.98~4.02之间,如放入pH9.18(四硼酸钠)标准缓冲液中,此时pH计显示的值应在9.16~9.20之间,否则需重新校正pH计。
6、组织固定液测量时正确操作:用蒸馏水冲洗pH计(玻璃球部位)并用吸水纸吸尽水分,将pH计插入待测组织固定液中,轻轻振动pH计(约10秒钟),静置pH计,待pH计上的数值稳定(不跳动)后便读取其数字,此数字则是固定液的pH值。
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